COMPONENTES DEL MEDIO PARA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

Componentes del medio para cultivo de tejidos vegetales

El éxito en el ámbito de proyectos agropecuarios va de la mano de los avances de la tecnología vegetal, esta vez veremos sobre los componentes del medio para el cultivo de tejidos vegetales.

En la actualidad existen innumerables formulaciones cada una de las cuales contienen entre 15 y 35 compuestos químicos que suministran:
Carbono
Nutrimientos minerales
Vitaminas
Agente gelificante
Sustancias reguladoras del crecimiento.

Otros componentes

Generalmente se hace referencia al conjunto de componentes a+b+c como el medio basal (MB)

Fuentes de carbono.- muy pocos cultivos in vitro son autótrofos, y por lo tanto es necesario agregar al medio una fuente de carbono. La sacarosa (2 – 5%) es el azúcar que mas se utiliza, y se puede remplazar por glucosa y en menor medida por fructuosa; la maltosa y la galactosa son menos efectivas. La incorporación de mioinosiotol al medio (100 mg/litro) generalmente da como resultado un mejor crecimiento de los callos y suspensiones celulares.

Nutrimentos minerales.- cualitativamente los medios de cultivo aportan los mismos elementos (macro y micronutrientes) que se consideran esenciales para el crecimiento de plantas enteras. El nitrógeno se suministra en forma de nitrato y amonio; aunque los cultivos pueden prosperar con solo nitrato o solo amonio como fuente nitrogenado, en este ultimo caso el medio debe contener también acido cítrico, succínico o málico. Otras fuentes de nitrógeno incluyen glutamina, urea y caseína hidrolizada (CH).

Los medios de cultivo contienen fosforo, calcio, magnesio y azufre. La adicción de hierro conjuntamente con un agente quelante (Na2EDTA) lo hace disponible en un amplio rango.

Vitaminas.- si bien los medios de cultivo contienen comúnmente varias vitaminas, es probable que en forma general solo sea esencial la incorporación de tiamina.

Agente gelificante.- en los medios semisólidos comúnmente se adiciona agar (0.6 a 1.0%). Se debe considerar especialmente la pureza del agar, ya que es frecuente la presencia de impurezas de naturaleza variada; la marca comercial y las concentraciones del agar utilizado pueden alternar las respuestas in vitro de los cultivos.
Reguladores de crecimiento.- en algunos casos se obtienen en los cultivos in vitro las respuestas deseadas mediante el empleo del MB sin reguladores de crecimiento.

Sin embargo, en la mayoría de los casos se hace necesario agregar al medio sustancias reguladoras de crecimiento, generalmente del tipo de las auxinas o las citosinas. Las auxinas que mas se utilizan en el establecimiento de los cultivos son: 2,4-D, ANA, AIA y AIB; las citosinas que mas se emplean son:

KIN, BAP Y ZEA
Las giberelinas, especialmente el AG3, han demostrado ser necesarias para el cultivo de ápices o meristemas caulinares de varias especies vegetales.

otros componentes.- existen una larga lista de componentes que se han adicionado ocasionalmente a los medios de cultivo, como fuentes de nitrógeno reducido, factores de crecimiento, carbohidratos y otros.

Además la glicina, en ocasiones se incorporaal medio otro aminoácido como aspargina, cisteína y L-tirosina. En general, no son constituyentes esenciales de los medios e inclusive, en concentraciones relativamente altas, pueden tener efectos inhibitorios sobre los cultivos.

El empleo de sustancias antioxidantes (acido ascórbico, L-cisteína) puede ser útil para el cultivo de explantes con alto contenido de polifenoles, cuya oxidación produce oscurecimiento y muerte de los explantes. En estos casos se usa las soluciones antioxidantes durante la preparación del explante se acorta el intervalo de tiempo entre subcultivos.

Como un medio para disminuir los efectos nocivos de la oxidación de polifenoles. El carbón activado (0.1 a 5%), incorporado al medio, es de utilidad en el cultivo de diferentes explantes.

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Escrito por Wil, el 4 agosto, 2012.


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