Dilución del agar y distribución del medio para cultivo de tejidos vegetales

Seguimos con temas importantísimos sobre biotecnología vegetal para poner en práctica en nuestros proyectos agropecuarios.

La dilución del agar y distribución del medio para efecto de cultivo de tejidos vegetales es algo que debemos saber.
El agar puede ser disuelto en agitadoras con calentamiento; no debe olvidarse el uso de un agitador. También puede ser disuelto por autoclave por 3 a 7 min a 120° C, especialmente cuando se preparan grandes cantidades de medios.

Si no se cuenta con un dosificador automático, se puede emplear una bureta o en su efecto pequeños vasos de precipitados, dependiendo de la precisión que se quiera en la cantidad de medios en los tubos o frascos de cristal. Generalmente se añaden de 30 ml cuando el medio es solido y de 10 -15 ml cuando esta en estado liquido.

Esterilización del medio de cultivo
El medio se esteriliza en autoclave durante 15 – 20 minutos a 121°C. el tiempo optimo de exposición a esta temperatura varia con la cantidad de medio preparado y con el volumen de medio por recipientes. A continuación se muestra la tabla, donde aparece el mínimo tiempo requerido para la esterilización de diferentes volúmenes.

Dilusión del agar y distribución del medio

Algunos suplementos de los medios de cultivo son sustancias termolábiles y no pueden ser esterilizadas por autoclave. Por lo cual son esterilizados por filtración, a través de un filtro de acetato de celulosa con un tamaño de poro de 0.22 micrómetros. Después de la esterilización en autoclave, cuando el medio alcanza una temperatura entre 40 a 45 °C se le agrega la solución ya filtrada, repartiéndose a continuación el medio de cultivo bajo condiciones estériles en una cámara de flujo laminar.

Tiempo de almacenamiento
Es recomendable usar el medio de cultivo después de esterilizado, para evitar posibles problemas de fallas durante la esterilización.

El medio de cultivo se puede almacenar a temperatura ambiente por 1 o 2 semanas. Quizá se puede aumentar el tiempo de almacenamiento en refrigeración. Sin embargo el medio debe ser usado fresco, siempre que sea posible, sobre todo si es un trabajo de investigación. Los medios que contienen AIA, tienen menor vida de anaquel, es recomendable usarlos antes de la semana.



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