PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

Preparación del medio de cultivo

Los proyectos agropecurios son de gran importancia por ello la biotecnologia vegetal nos da las pautas para seguir con proyectos de maximo rendimiento.

Es necesario preparar el medio utilizando agua bidestilada o agua desmineralizada-destilada (H2O, DD). Se debe evitar el almacenamiento prolongado del medio para evitar la acumulación de contaminantes; todas las sustancias químicas usadas para su preparación deben ser de un alto grado de pureza.

Preparación de soluciones madre
Las soluciones madres de sales inorgánicas se deben preparar combinándolas de modo que no precipiten. La solución madre de medio de Murashige y Skoog (1962) se prepara de la siguiente manera:

MACRONUTRIENTES
Preparación del medio de cultivo macronutrientes biotecnologia vegetal

MICRONUTRIENTES

Preparación del medio de cultivo micronutrientes biotecnologia vegetal

Fuente de hierro
Acidoetilendiaminotetrac (Na2EDTA) (sal disódica) 37.3
ético
Sulfato ferroso (FeSO2.7H2O) 27.8
Los macronutrientes se disuelven en un litro de agua a excepción del cloruro de calcio que se lo disuelve por separado para evitar que se precipite.

Los micronutrientes se disuelven en 500 cc de agua destilada

Para preparar la fuente de hierro se coloca 200cc de agua destilada a calentar hasta ebullición. Se divide después en 100 ml y se disuelve cada reactivo por separado. Luego se mezcla el FeSO4 .7H2O sobre el Na2 EDTA, nunca a la inversa, pues se precipita.

Todas estas soluciones salinas deben ser enrasadas en matraz aforado. De estas se toma determinadas cantidades de mililitros para añadir a cada litro de medios los miligramos de sales necesarios.

Los compuestos orgánicos que son relativamente insolubles en agua requieren de un codisolvente.
Las citoquininas son bases débiles, por tanto deben disolverse en acido diluido, las auxinas por su parte son ácidos débiles y deben disolverse en bases diluidas o en etanol absoluto. Generalmente se usa 0.3 ml de HCL 1N O NaOH 1N por cada 10 mg de citoquininas o auxina.

Las soluciones madres deben mantenerse en refrigeración o la temperatura ambiente si se conoce su estabilidad. Regularmente se debe chequear posible precipitación o visible contaminación por microrganismos. Las soluciones madres de macronutrientes, auxinas y hierro deben guardarse en frascos ámbar.

Las sustancias que se agregan en grandes cantidades al medio de cultivo como azucares, agar, caseína hidrolizada, extracto de malta no necesitan ser disueltas y conservadas como soluciones madres, deberán pesarse y añadirse directamente al medio de cultivo.

Ajuste de pH
Para ajustar el pH del medio de cultivo, se emplearan soluciones 1,0 N de NaOH o KOH y 1.0 N de CHL. Se ajustar el pH antes que el medio sea diluido a su volumen final y antes de agregar el agar.

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Escrito por Wil, el 8 agosto, 2012.


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